-
- Wczesna reperfuzja z użyciem tkankowego aktywatora plazminogenu jest jedynym środkiem terapeutycznym do leczenia ogniskowego niedokrwienia mózgu o udowodnionej skuteczności u pacjentów.
- Niemniej jednak nowe wglądy w patofizjologię neuronów, komórek glejowych i los śródbłonka po udarze wymagają zastosowania nowych strategii w celu poprawy leczenia udaru samodzielnie lub w połączeniu z trombolizą indukowaną tkankowym aktywatorem plazminogenu.
- Niestety, pomimo mnóstwa leków, które wykazują wyraźne korzystne działanie w zwierzęcych modelach niedokrwienia doświadczalnego, ich późniejsze zastosowanie w badaniach klinicznych okazało się rozczarowujące. W związku z tym należy wziąć pod uwagę, że nowe modele zwierzęce ogniskowego niedokrwienia mózgu mogą być wymagane przed kliniczną oceną nowej cząsteczki.
- Mikroiniekcja in situ oczyszczonej trombiny mysiej została wykorzystana do wywołania miejscowego tworzenia skrzepów u znieczulonych myszy. Prędkość krwi mózgowej mierzono w sposób ciągły przez cały czas trwania badania. Następnie zmierzono skuteczność rekombinowanego tkankowego aktywatora plazminogenu do indukowania trombolizy i jego późniejszego wpływu na objętość zawału.
- Wstrzyknięcie trombiny in situ prowadzi do powtarzalnego tworzenia się skrzepu i uszkodzenia kory mózgu. Tromboliza indukowana rekombinowanym tkankowym aktywatorem plazminogenu zmniejszyła objętość zawału o 36,8% w porównaniu z nieleczonymi myszami kontrolnymi.
- Opisujemy oryginalny i powtarzalny mysi model tworzenia skrzepów in situ i reperfuzji, który można wykorzystać do zbadania nowych strategii terapeutycznych w celu poprawy leczenia udaru.
Hodowane ludzkie fibroblasty syntetyzują i wydzielają trombospondynę i włączają ją do macierzy zewnątrzkomórkowej
- Trombospondyna, główna glikoproteina uwalniana z ziarnistości alfa płytek krwi stymulowanych trombiną , jest trimerem 160 kilodaltonów z wiązaniami dwusiarczkowymi.
- Hodowane ludzkie fibroblasty napletka i płodowe płuca wydzielały trombospondynę (oznaczoną w teście immunoenzymatycznym) do pożywki hodowlanej w sposób zależny od czasu (odpowiednio 15,7 i 5,8 mikrogramów na 10(6) komórek na 24 godziny); wydzielanie było blokowane przez cykloheksymid.
- [3H]trombospondynę wyizolowano z pożywki pohodowli fibroblastów znakowanych [3H]leucyną iz warstw komórkowych króliczym poliklonalnym lub mysim monoklonalnym antytrombospondyną sprzężoną z białkiem A-Sepharose gronkowcowym.
- Immunologicznie wyizolowana [3H]trombospondyna migrowała w żelach NaDodSO4/poliakrylamidowych z oczyszczoną trombospondyną płytkową, zarówno z redukcją, jak i bez.
- Mikroskopia immunofluorescencyjna z użyciem króliczych poliklonalnych i mysich przeciwciał monoklonalnych przeciw trombospondynie zlokalizowała trombospondynę we włóknistej macierzy zewnątrzkomórkowej otaczającej komórki.
- W ten sposób hodowane ludzkie fibroblasty wydzielają trombospondynę i włączają ją do macierzy zewnątrzkomórkowej.
Wydzielane fosfoproteiny związane z transformacją nowotworową: ścisła homologia z białkami osocza rozszczepionymi podczas krzepnięcia krwi.
- Wcześniej wykazaliśmy, że wiele różnych komórek nowotworowych gryzoni i ludzi wydziela znacznie podwyższone poziomy związanej z transformacją fosfoproteiny o masie cząsteczkowej (w zależności od gatunku zwierzęcia) od 58 000 do 69 000.
- Dzięki przeciwciałom skierowanym przeciwko fosfoproteinie wydzielanej przez nowotwór (szczur), zidentyfikowaliśmy antygenowo pokrewne białko w normalnym osoczu szczura i człowieka.
- Białko osocza szczura i fosfoproteiny wydzielane przez nowotwór szczura współmigrowały na żelach poliakrylamidowych i były identycznie rozszczepiane podczas krzepnięcia krwi, jak również przez oczyszczoną trombinę .
- Mysie makrofagi eksprymowały podobną lub identyczną fosfoproteinę, co sugeruje, że komórki monocytowe mogą być źródłem normalnego białka osocza.
- Zgodnie z podwyższonym wydzielaniem tego białka przez komórki nowotworowe, osocze i surowice pacjentów onkologicznych zawierały podwyższone poziomy tego białka, co zwiększa prawdopodobieństwo, że ten krążący marker może okazać się przydatny do monitorowania obciążenia nowotworem.
- Sekwencja aminokwasowa pochodząca od końca aminowego fosfoproteiny nowotworu szczura wskazuje, że różni się od białek wcześniej sekwencjonowanych, ale może być związana z kinazami białkowo-tyrozynowymi kodowanymi przez geny wirusowe i proto-onc.
Neuroserpina, związany z mózgiem inhibitor tkankowego aktywatora plazminogenu, jest zlokalizowany głównie w neuronach. Implikacje dla regulacji uczenia się motorycznego i przeżycia neuronów.
- Klon cDNA dla inhibitora proteinazy serynowej (serpiny), neuroserpiny, wyizolowano z biblioteki cDNA całego ludzkiego mózgu, a rekombinowane białko poddano ekspresji w komórkach owadzich.
- Oczyszczone białko jest skutecznym inhibitorem tkankowego aktywatora plazminogenu (tPA), o widocznej stałej szybkości drugiego rzędu wynoszącej 6,2 x 10(5) M-1 s-1 dla postaci dwułańcuchowej.
- Jednakże, w przeciwieństwie do innych znanych inhibitorów aktywatora plazminogenu, neuroserpina jest skuteczniejszym inaktywatorem tPA niż aktywator plazminogenu typu urokinazy.
- Neuroserpina również skutecznie hamowała trypsynę i czynnik wzrostu nerwów-gamma, ale reagowała tylko powoli z plazminą i trombiną .
- Analiza Northern blot wykazała, że informacyjne RNA o wielkości 1,8 kilopar zasad ulega ekspresji głównie w mózgu i rdzeniu kręgowym dorosłego człowieka, a badania immunohistochemiczne normalnej tkanki myszy wykryły silne zabarwienie głównie w komórkach neuronalnych z czasami dodatnimi komórkami mikrogleju.
- Barwienie było najbardziej widoczne w komórkach wyściółki splotu naczyniówkowego, komórkach Purkiniego móżdżku, wybranych neuronach podwzgórza i hipokampa oraz w zmielinizowanych aksonach commissury.
- Doniesiono, że ekspresja tPA w tych regionach jest wysoka i była wcześniej skorelowana zarówno z uczeniem się motorycznym, jak i przeżyciem neuronów.
- Podsumowując, dane te sugerują, że neuroserpina jest prawdopodobnie krytycznym regulatorem aktywności tPA w ośrodkowym układzie nerwowym i jako taka może odgrywać ważną rolę w plastyczności neuronalnej i/lub utrzymaniu.
Dowody na to, że depolimeryzacja mikrotubul na wczesnym etapie cyklu komórkowego jest wystarczająca do zainicjowania syntezy DNA.
- Leki zaburzające mikrotubule inicjowały syntezę DNA w wolnych od surowicy hodowlach nieproliferujących komórek podobnych do fibroblastów. Dodanie kolchicyny do fibroblastów kurcząt, myszy i ludzi w pożywce bez surowicy stymulowało włączanie tymidyny co najmniej dwukrotnie, przy połowie maksymalnego stężenia 1 X 10(-7) M.
- Ta stymulacja reprezentowała do 75% maksymalnej stymulacji przez trombinę i towarzyszyła jej wzrost procentu znakowanych jąder. Inne leki zaburzające mikrotubule wykazywały podobną stymulację, podczas gdy lumikolchicyna nie wywierała żadnego efektu.
- Pośrednie barwienie immunofluorescencyjne tubuliny wykazało korelację między depolimeryzacją mikrotubul a inicjacją syntezy DNA przez te leki. Dwugodzinne traktowanie 10(-6) M kolchicyną spowodowało całkowite rozerwanie sieci mikrotubularnej i stymulowało włączanie tymidyny (mierzone 28 godzin później) w jeszcze większym stopniu niż ciągła ekspozycja na kolchicynę.
- Podobna 2-godzinna ekspozycja na 10(-6) M colcemid również stymulowała włączanie tymidyny i prowadziła do 50% wzrostu liczby komórek. Taksol, lek stabilizujący mikrotubule cytoplazmatyczne, blokuje inicjację syntezy DNA przez kolchicynę, co wskazuje, że depolimeryzacja mikrotubul jest niezbędna do tej inicjacji.
- Aby określić, czy depolimeryzacja mikrotubul jest zaangażowana w stymulację syntezy DNA przez inne czynniki wzrostu, do komórek dodano wysokooczyszczoną ludzką trombinę z lub bez kolchicyny. W żadnym przypadku kolchicyna plus trombina nie zwiększyły syntezy DNA powyżej maksymalnej stymulacji przez samą trombinę .
- Ponadto wstępne traktowanie kultur taksolem (5 mikrogramów/ml) hamowało około 30% stymulacji wbudowywania tymidyny przez trombinę .
GMP IL4, 50µg
04-GMP-HU-IL4-50UG Gentaur Genprice 50µg 483 EUR Human Alpha-Thrombin (human plasma), purified
TBNA16-N-100 Alpha Diagnostics 100 ug 164 EUR Human beta-Thrombin (human plasma), purified
TBNB17-N-100 Alpha Diagnostics 100 ug 202 EUR Human Gamma-Thrombin (human plasma), purified
TBNG18-N-250 Alpha Diagnostics 250 ug 225 EUR Streptavidin Tag 490 50µg
ABP-NAB-SA490 Allele Biotech 50µg Ask for price Streptavidin Tag 590 50µg
ABP-NAB-SA590 Allele Biotech 50µg Ask for price Streptavidin Tag 650 50µg
ABP-NAB-SA650 Allele Biotech 50µg Ask for price Streptavidin Tag HRP 50µg
ABP-NAB-SAHRP Allele Biotech 50µg Ask for price CORNING® OSTEOPONTIN, HUMAN, 50µG
354256 CORNING 1/pk 387 EUR Thrombin
HY-114164 MedChemExpress 500ug 119 EUR Mouse Thrombin ELISA kit
E03T0084-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR Mouse Thrombin ELISA kit
E03T0084-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR Mouse Thrombin ELISA kit
E03T0084-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR Purified Mouse Hemoglobin
HEMG17-N-1 Alpha Diagnostics 1 mg 225 EUR Ceruloplasmin Mouse, purified
CP16-N-25 Alpha Diagnostics 25 ug 225 EUR Human Thrombin
7-06655 CHI Scientific 500µg Ask for price Human Thrombin
7-06656 CHI Scientific 1mg Ask for price Human Thrombin
7-06657 CHI Scientific 5mg Ask for price Bovine Thrombin
7-06658 CHI Scientific 50U Ask for price Bovine Thrombin
7-06659 CHI Scientific 100U Ask for price Bovine Thrombin
7-06660 CHI Scientific 250U Ask for price Porcine Thrombin
7-06661 CHI Scientific 500U Ask for price Porcine Thrombin
7-06662 CHI Scientific 1000U Ask for price Porcine Thrombin
7-06663 CHI Scientific 2000U Ask for price Thrombin Antibody
abx022382-05mg Abbexa 0.5 mg 1156 EUR Thrombin Antibody
abx022419-100ug Abbexa 100 ug 425 EUR Thrombin Protein
20-abx260079 Abbexa - 648.00 EUR
- 1010.00 EUR
- 4128.00 EUR
- 0.5 mg
- 1 mg
- 5 mg
Thrombin Protein
20-abx261309 Abbexa - 3418.00 EUR
- 328.00 EUR
- 230.00 EUR
- 1 mg
- 20 ug
- 5 ug
Thrombin antibody
70R-10615 Fitzgerald 500 ug 529 EUR Thrombin antibody
70R-10617 Fitzgerald 500 ug 541 EUR Thrombin antibody
20R-1363 Fitzgerald 10 mg 281 EUR Thrombin antibody
20R-1364 Fitzgerald 10 mg 247 EUR Thrombin antibody
20R-1372 Fitzgerald 10 mg 281 EUR Thrombin antibody
70R-TS001 Fitzgerald 500 ug 529 EUR Thrombin protein
30-1215 Fitzgerald 250 units 420 EUR Thrombin Antibody
6685-100 Biovision 338 EUR Thrombin Antibody
6685-30T Biovision 146 EUR Mouse Thrombin(TM)ELISA Kit
GA-E0620MS-48T GenAsia Biotech 48T 336 EUR Mouse Thrombin(TM)ELISA Kit
GA-E0620MS-96T GenAsia Biotech 96T 534 EUR Haptoglobin Mouse, purified protein
HGLB11-N-25 Alpha Diagnostics 25 ug 225 EUR Hemopexin Mouse, purified protein
HPEX16-N-25 Alpha Diagnostics 25 ug 225 EUR Thrombin inhibitor 1
HY-U00370 MedChemExpress 1mg 2337 EUR Human Thrombin Antibody
11571-05011 AssayPro 150 ug 217 EUR Human Thrombin Antibody
35147-05111 AssayPro 150 ug 261 EUR Polyclonal Thrombin Antibody
APR10458G Leading Biology 0.1mg 484 EUR Thrombin Receptor Antibody
33500-100ul SAB 100ul 252 EUR Thrombin Receptor Antibody
33500-50ul SAB 50ul 187 EUR Thrombin III Antibody
20-abx121017 Abbexa - 300.00 EUR
- 439.00 EUR
- 189.00 EUR
- 100 ul
- 200 ul
- 30 ul
Thrombin III Antibody
abx023271-10ml Abbexa 10 ml 411 EUR Thrombin III Antibody
abx023272-1ml Abbexa 1 ml 565 EUR Pig Thrombin Protein
abx260052-1000U Abbexa 1000 U 773 EUR Pig Thrombin Protein
abx260052-2000U Abbexa 2000 U 1010 EUR Pig Thrombin Protein
abx260052-500U Abbexa 500 U 523 EUR Cow Thrombin Protein
abx260334-100U Abbexa 100 U 300 EUR Cow Thrombin Protein
abx260334-250U Abbexa 250 U 439 EUR Cow Thrombin Protein
abx260334-50U Abbexa 50 U 244 EUR Thrombin, HEK Protein
20-abx260339 Abbexa - 1720.00 EUR
- 411.00 EUR
- 1066.00 EUR
- 100 ug
- 10 ug
- 50 ug
Thrombin Receptor Antagonist
H-2514.0500 Bachem 0.5mg 176 EUR Thrombin Receptor Antagonist
H-2514.1000 Bachem 1.0mg 273 EUR Thrombin Receptor Antibody
ABF0263 Lifescience Market 100 ug 438 EUR Thrombin antibody (HRP)
60R-1045 Fitzgerald 200 ug 418 EUR Thrombin antibody (FITC)
60R-1046 Fitzgerald 100 ug 418 EUR Thrombin antibody (biotin)
60R-1047 Fitzgerald 100 ug 418 EUR Thrombin antibody (HRP)
60R-1048 Fitzgerald 200 ug 448 EUR Thrombin antibody (HRP)
60R-1078 Fitzgerald 200 ug 445 EUR Thrombin Receptor Antibody
AF0263 Affbiotech 200ul 304 EUR Thrombin Receptor antibody
70R-30775 Fitzgerald 100 ug 327 EUR Thrombin protein (Bovine)
30-1217 Fitzgerald 25 ku 244 EUR Thrombin protein (Porcine)
30-1915 Fitzgerald 500 IU 489 EUR alpha Thrombin protein
30C-CP3077U Fitzgerald 100 ug 165 EUR alpha Thrombin protein
30R-AT001 Fitzgerald 1 KU 241 EUR anti-Thrombin Receptor
YF-PA11655 Abfrontier 50 ug 363 EUR anti-Thrombin Receptor
YF-PA11656 Abfrontier 100 ul 403 EUR Thrombin Cleavage Kit
K377-500 Biovision 675 EUR Thrombin Sepharose Beads
7925-1 Biovision 218 EUR Thrombin Sepharose Beads
7925-25 Biovision 1762 EUR Thrombin Sepharose Beads
7925-5 Biovision 697 EUR Mouse thrombin receptor(TR)ELISA Kit
GA-E0302MS-48T GenAsia Biotech 48T 336 EUR Mouse thrombin receptor(TR)ELISA Kit
GA-E0302MS-96T GenAsia Biotech 96T 534 EUR Mouse thrombin receptor(TR)ELISA Kit
QY-E21447 Qayee Biotechnology 96T 361 EUR Mouse thrombin receptor,TR ELISA Kit
CN-02709M1 ChemNorm 96T 451 EUR Mouse thrombin receptor,TR ELISA Kit
CN-02709M2 ChemNorm 48T 300 EUR Mouse Anti Thrombin III ELISA kit
E03A0895-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR Mouse Anti Thrombin III ELISA kit
E03A0895-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR Mouse Anti Thrombin III ELISA kit
E03A0895-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR Mouse Thrombin antithrombin complex ELISA kit
E03T0502-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR Mouse Thrombin antithrombin complex ELISA kit
E03T0502-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR Mouse Thrombin antithrombin complex ELISA kit
E03T0502-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR Mouse Thrombin-thrombomodulin complex ELISA kit
E03T0551-192T BlueGene 192 tests 1270 EUR Mouse Thrombin-thrombomodulin complex ELISA kit
E03T0551-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 520 EUR Mouse Thrombin-thrombomodulin complex ELISA kit
E03T0551-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 685 EUR Mouse IgG Fab fragment, purified
20008-1-FAB Alpha Diagnostics 1 mg 164 EUR Mouse IgG (Fc) fragment, purified
20008-1-FC Alpha Diagnostics 0.5 mg 250 EUR Mouse IgA isotype control, purified
20102-100 Alpha Diagnostics 100 ug 164 EUR Mouse IgG1 isotype control, purified
20102-101 Alpha Diagnostics 100 ug 141 EUR Mouse IgG2a isotype control, purified
20102-102 Alpha Diagnostics 100 ug 141 EUR Mouse IgG2b isotype control, purified
20102-103 Alpha Diagnostics 100 ug 141 EUR Mouse IgG3 isotype control, purified
20102-104 Alpha Diagnostics 100 ug 141 EUR Mouse IgM isotype control, purified
20102-105 Alpha Diagnostics 100 ug 141 EUR Mouse IgE isotype control, purified
20102-106 Alpha Diagnostics 100 ug 164 EUR Razem badania te wykazują, że depolimeryzacja mikrotubul wystarcza do zainicjowania zarówno syntezy DNA, jak i zdarzeń prowadzących do podziału komórek i sugerują, że depolimeryzacja mikrotubul może być wymaganym etapem inicjacji proliferacji komórek przez czynniki wzrostu, takie jak wysoko oczyszczona ludzka trombina .