Aktywne układy biokompatybilne są obecnie bardzo interesujące ze względu na ich możliwe zastosowania w dostarczaniu leków lub antidotum w określonych lokalizacjach. W niniejszym artykule przedstawiamy syntezę i badanie samonapędzających się mikrocząstek zasilanych reakcjami enzymatycznymi oraz ich ukierunkowany ruch w gradiencie stężenia substratu. Mikrocząstki polistyrenowe funkcjonalizowano za pomocą enzymów ureazy i katalazy, stosując procedurę wiązania biotyna – streptawidyna . Ruch cząstek pokrytych enzymem badano w obecności odpowiednich podłoży, stosując mikroskopię optyczną i analizę dynamicznego rozpraszania światła. Dyfuzja cząstek stwierdzono, że wzrasta w sposób zależny od stężenia substratu. Ukierunkowany ruch chemotaktyczny tych napędzanych enzymami silników w górę gradientu substratu zbadano przy użyciu trójwlotowej architektury mikroprzepływowej kanału.
Zespoły molekularne ligand-receptor-białko G na kulkach do badań mechanistycznych i badań przesiewowych za pomocą cytometrii przepływowej.
- Receptory sprzężone z białkiem G tworzą potrójny kompleks liganda, receptora i heterotrimeru białka G (LRG) podczas przekazywania sygnału z zewnątrz do wnętrza komórki. Naszym celem było opracowanie jednorodnego, małoobjętościowego, opartego na kulkach podejścia zgodnego z wysokoprzepustową cytometrią przepływową, która umożliwiłaby ocenę zespołów molekularnych receptorów sprzężonych z białkiem G.
- Perełki dekstranu poddano derywatyzacji w celu przenoszenia chelatowanego niklu w celu wiązania białka zielonej fluorescencji ze znacznikiem heksahistydynowym (GFP) i białek G ze znacznikiem heksahistydynowym. Kompleksy trójskładnikowe złożono na tych kulkach, stosując ligand fluorescencyjny z receptorem typu dzikiego lub białkiem fuzyjnym receptor-Gialpha2 oraz z ligandem niefluorescencyjnym i białkiem fuzyjnym receptor-GFP.
- Streptawidyną – powlekane kulki polistyrenowe wykorzystywały biotynylowane przeciwciała anty-FLAG do wiązania znakowanych przez FLAG białek G w celu złożenia trójskładnikowego kompleksu. Walidację osiągnięto poprzez wykazanie zależności czasu i stężenia tworzenia kompleksu trójskładnikowego.
- Pomiary powinowactwa ligandu do receptora na cząsteczkach , kompleksu ligand-receptor do białka G na cząsteczkach i białka fuzyjnego receptor-Gialpha2 do Gbetagamma były zgodne z porównywalnymi zestawami w zawiesinie detergentu . Oceniono wydajność w aplikacjach reprezentujących potencjał tych zespołów dla złożonych mechanizmów trójskładnikowych.
- Pokazaliśmy związek dla rodziny ligandów między powinowactwem LR i LRG i scharakteryzowaliśmy powinowactwo receptorów fuzyjnych typu dzikiego i GFP z białkiem G. Pokazaliśmy również potencjał pomiarów kinetycznych, aby umożliwić obserwację poszczególnych etapów demontażu kompleksu trójskładnikowego indukowanego przez GTP i odróżnić szybki etap spowodowany przez demontaż RG w porównaniu z wolniejszym etapem demontażu Galphabetagamma.
Odpychanie diamagnetyczne — wszechstronne narzędzie do bezetykietowej obsługi cząstek w urządzeniach mikroprzepływowych.
- Przedstawiamy badanie diamagnetycznych sił odpychania w celu selektywnej manipulacji mikrocząsteczkami wewnątrz urządzeń mikroprzepływowych. Materiały diamagnetyczne, takie jak polimery, są odpychane od pól magnetycznych, co znacznie zwiększa zawieszenie przedmiotu diamagnetycznego w paramagnetycznym roztworze Mn(2+).
- Zademonstrowano wszechstronność odpychania diamagnetycznego w zakresie wychwytywania, ogniskowania i odchylania cząstek polistyrenu w trzech przykładowych zastosowaniach.
- Po pierwsze, pary magnesów z przeciwnymi biegunami skierowanymi do siebie zostały rozmieszczone wzdłuż mikrokapilary, aby wychwycić czopki różnie funkcjonalizowanych cząstek do równoczesnego testu powierzchniowego, w którym biotyna była selektywnie związana z czopem cząstek pokrytych streptawidyną przy użyciu tylko 22 nL odczynnika.
- Po drugie, poprzez nieznaczną modyfikację konstrukcji pola magnetycznego osiągnięto szybkie skupienie cząstek w wąskim strumieniu centralnym z natężeniem przepływu 650 mikromów (-1) w celu wstępnego zatężenia cząstek . W trzecim zastosowaniu cząstki polistyrenu 5 i 10 mikrometrów oddzielono od siebie w ciągłym przepływie przez przepuszczenie mieszaniny cząstek przez komorę mikroprzepływową z prostopadłym polem magnetycznym, metodą określaną jako diamagnetoforeza.
- Rozdzielanie badano między szybkościami przepływu 20-100 mikrolh(-1), z pełną rozdzielczością populacji cząstek osiągniętą przy 20 mikrolh(-1). Eksperymenty te pokazują potencjał odpychania diamagnetycznego do prostej, pozbawionej etykiet manipulacji cząstkami i innymi obiektami diamagnetycznymi, takimi jak komórki, w szeregu technik bioanalitycznych.
W pełni zautomatyzowany test immunologiczny do wykrywania swoistego antygenu prostaty przy użyciu kulek nanomagnetycznych i kompozytów mikrokulek polistyrenowych , „Beads on Beads”.
- Kulki magnetyczne służyły jako konwencjonalna platforma do testów biologicznych w biotechnologii. W tym badaniu przeprowadzono w pełni zautomatyzowany test immunologiczny przy użyciu nowatorskich kompozytów nano- i mikrokulek skonstruowanych przez łączenie kulek nanomagnetycznych na mikrokulki polistyrenowe , zatytułowanych “Koraliki na kulkach”. Bakteryjne cząsteczki magnetyczne (BacMPs) o nano-wielkości prezentujące domenę wiążącą immunoglobulinę G (IgG) białka A (domena ZZ) zostały użyte do konstrukcji „Beads on Beads” poprzez interakcję biotyna- streptawidyna .
- Wydajny montaż „Beads on Beads” przeprowadzono poprzez stopniowe dodawanie znakowanych biotyną BacMP do mikrokulek polistyrenowych pokrytych streptawidyną .
- Około 2000 BacMP zostało jednorodnie zebranych na jednej mikrokulce bez agregacji. Skonstruowane „Beads on Beads” zostały namagnesowane i oddzielone od zawiesiny za pomocą zautomatyzowanego systemu separacji magnetycznej o wyższej wydajności niż same BacMP.
- Ponadto przeprowadzono w pełni zautomatyzowane wykrywanie antygenów swoistych dla prostaty z granicą wykrywalności 1,48 ng mL(-1). Na podstawie tego wstępnego testu można zauważyć, że „Beads on Beads” może być potężnym narzędziem w opracowywaniu wysokowydajnych, w pełni zautomatyzowanych, multipleksowanych testów biologicznych.
Perełki kodowane metodą spektroskopii Ramana o wzmocnionej powierzchni do multipleksowych testów immunologicznych.
- Dla multipleksowych testów immunologicznych opisano nowy typ zakodowanych kulek, który wykorzystuje powierzchniowo wzmocnione rozpraszanie Ramana (SERS). Nanocząstki srebra osadzono w kulkach sulfonowanego polistyrenu (PS) metodą poliolową i zastosowano je jako substraty aktywne SERS.
- Związki organiczne znakowane Ramanem, takie jak 4-metylobenzenotiol (4-MT), 2-naftalenotiol (2-NT) i benzenotiol (BT) zostały następnie zaadsorbowane na nanocząstkach srebra w sulfonowanej kulce PS. Chociaż zademonstrowano tu tylko trzy rodzaje kodowania, różne kombinacje tych związków organicznych znakowanych Ramanem mogą potencjalnie dać dużą liczbę znaczników.
- Cząstki ze znacznikiem Ramana pokryto następnie powłoką krzemionkową przy użyciu tetraetoksyortokrzemianu (TEOS) dla stabilności chemicznej i biokompatybilności.
- Otrzymane kulki wykazywały unikalne i intensywne sygnały Ramana dla znakowanych związków organicznych. Wykazaliśmy, że kulki kodowane SERS mogą być stosowane do wykrywania multipleksów z modelem wykorzystującym streptawidynę i p53.
- W naszym systemie zdarzenie wiązania cząsteczek docelowych i rodzaj ligandu można jednocześnie rozpoznać za pomocą spektroskopii Ramana przy użyciu pojedynczego wzbudzenia linii laserowej (514,5 nm).
Wiązanie biotynylowanego DNA ze streptawidyną – powlekanym lateksem polistyrenowym : wpływ długości łańcucha i wielkości cząstek .
- Wiązanie biotynylowanego DNA na końcu 5′, o wielkości od 100 do 5000 par zasad, badano przy użyciu cząstek lateksu polistyrenowego pokrytych streptawidyną o średnicach od 0,944 do 0,090 mikrona.
- Eksperymentalne stałe wiązania i stałe szybkości postępującej reakcji w fazie stałej zostały określone jako o kilka rzędów wielkości niższe niż wartości oddziaływania biotyna- streptawidyna w roztworze zgodnie z oczekiwaniami i wykazano, że zależą od wielkości zarówno ligandu, jak i substratu.
- Zaobserwowane przegięcie stałej wiązania biotynylowanego DNA pojawiło się około 1000 par zasad, prawdopodobnie wskazując na różne orientacje powierzchni makroligandu powyżej i poniżej tej krytycznej wielkości.
- Efekt ten był bardziej wyraźny w przypadku mniejszych cząstek lateksu użytych w tym badaniu i uwydatnił możliwe różnice w ułożeniu powierzchni streptawidyny na cząstkach o różnej wielkości .
- Stwierdzono, że ograniczenie dyfuzji do reakcji wiązania było znaczące we wszystkich przypadkach.
Streptavidin Coated Polystyrene Particles |
|||
SVP-05-100 | Spherotech | 100 mL | 1836 EUR |
Streptavidin Coated Polystyrene Particles |
|||
SVP-2000-4 | Spherotech | 4 mL | 466 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 1 µm |
|||
DNM-M011 | Creative Diagnostics | 1 mL | 636 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 0.3-0.4 µm |
|||
DNM-C005 | Creative Diagnostics | 10 mL | 676 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 0.4-0.6 µm |
|||
DNM-C006 | Creative Diagnostics | 10 mL | 823 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm |
|||
DNM-C007 | Creative Diagnostics | 10 mL | 663 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 1.5-1.9 µm |
|||
DNM-C008 | Creative Diagnostics | 5 mL | 823 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm |
|||
DNM-C009 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 4.0-4.9 µm |
|||
DNM-C010 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 5.0-5.9 µm |
|||
DNM-C011 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 6.0-8.0 µm |
|||
DNM-C012 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 8.0-12.9 µm |
|||
DNM-C013 | Creative Diagnostics | 4 mL | 1000 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 13.0-17.9 µm |
|||
DNM-C014 | Creative Diagnostics | 4 mL | 1079 EUR |
DiagPoly Streptavidin Coated Polystyrene Particles, 18.0-24.0 µm |
|||
DNM-C015 | Creative Diagnostics | 4 mL | 1092 EUR |
Streptavidin Polystyrene |
|||
SVP-1000-4 | Spherotech | 4 mL | 472 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVBP-02-10 | Spherotech | 10 mL | 263 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVBP-02-100 | Spherotech | 100 mL | 1542 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVBP-03-10 | Spherotech | 10 mL | 263 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVBP-03-100 | Spherotech | 100 mL | 1542 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-03-10 | Spherotech | 10 mL | 273 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-05-10 | Spherotech | 10 mL | 273 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-08-10 | Spherotech | 10 mL | 273 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-10-100 | Spherotech | 100 mL | 3318 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-10-5 | Spherotech | 5 mL | 283 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-100-4 | Spherotech | 4 mL | 395 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-15-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-15-50 | Spherotech | 50 mL | 1720 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-150-4 | Spherotech | 4 mL | 411 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-20-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-200-4 | Spherotech | 4 mL | 431 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-30-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-30-50 | Spherotech | 50 mL | 1720 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-40-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-400-4 | Spherotech | 4 mL | 492 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-50-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-60-50 | Spherotech | 50 mL | 1720 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-800-05 | Spherotech | 5 mL | 137 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP-800-4 | Spherotech | 4 mL | 472 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP01-008-5 | Spherotech | 5 mL | 426 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP1-200-4 | Spherotech | 4 mL | 659 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP1-30-5 | Spherotech | 5 mL | 482 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVP1-50-5 | Spherotech | 5 mL | 482 EUR |
Streptavidin Polystyrene Particles |
|||
SVPX-08-10 | Spherotech | 10 mL | 273 EUR |
BSA Coated Polystyrene Particles |
|||
BP-08-10 | Spherotech | 10 mL | 243 EUR |
BSA Coated Polystyrene Particles |
|||
BP-30-5 | Spherotech | 5 mL | 269 EUR |
BSA Coated Polystyrene Particles |
|||
BP-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
BSA Coated Polystyrene Particles |
|||
BP2-150-5 | Spherotech | 5 mL | 507 EUR |
Polystyrene Particle Size Standard |
|||
PPS-2 | Spherotech | mL | 127 EUR |
Polystyrene Particle Size Standard |
|||
PPS-3 | Spherotech | mL | 127 EUR |
Polystyrene Particle Size Standard |
|||
PPS-4 | Spherotech | mL | 131 EUR |
Polystyrene Particle Size Standard |
|||
PPS-5 | Spherotech | mL | 131 EUR |
Polystyrene Particle Size Standard |
|||
PPS-6 | Spherotech | mL | 131 EUR |
Streptavidin Fluorescent Particle Kit |
|||
SVFA-2552--6K | Spherotech | 6x1 mL | 462 EUR |
Streptavidin Fluorescent Particle Kit |
|||
SVFA-2558--6K | Spherotech | 6x1 mL | 462 EUR |
Streptavidin Fluorescent Particle Kit |
|||
SVFB-2552--6K | Spherotech | 6x1 mL | 462 EUR |
Streptavidin Fluorescent Particle Kit |
|||
SVFB-2558--6K | Spherotech | 6x1 mL | 462 EUR |
Anti-DNP Coated Polystyrene Particles |
|||
DNPP-50-2 | Spherotech | 2 mL | 289 EUR |
Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles |
|||
DIGP-05-2 | Spherotech | 2 mL | 279 EUR |
Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles |
|||
DIGP-20-2 | Spherotech | 2 mL | 289 EUR |
Anti-Digoxigenin Coated Polystyrene Particles |
|||
DIGP-40-2 | Spherotech | 2 mL | 289 EUR |
Ms IgG Coated Polystyrene Particles |
|||
MsGPX-50-5 | Spherotech | 5 mL | 314 EUR |
Streptavidin coated 96-well Plate |
|||
6523-5 | Biovision | 327 EUR | |
Polystyrene Particle Size Standard Kit |
|||
PPS-6K | Spherotech | mL | 239 EUR |
Streptavidin Blue Array Particle Kit |
|||
SVPAK-5067--10K | Spherotech | 10 mL | 994 EUR |
Streptavidin Blue Array Particle Kit |
|||
SVPAK-5067--5A | Spherotech | 5X1 mL | 588 EUR |
Streptavidin Blue Array Particle Kit |
|||
SVPAK-5067--5B | Spherotech | 5X1 mL | 588 EUR |
Oligo (dT)25 Coated Polystyrene Beads |
|||
OdT25P-100-4 | Spherotech | 4 mL | 411 EUR |
Streptavidin-Coated Strip Microwell Plate (Flat) |
|||
R-1102 | EpiGentek | 5/pk | 300.85 EUR |
Ms Anti-FLAG M2 Coated Polystyrene Particles |
|||
MPAF-05-2 | Spherotech | 2 mL | 310 EUR |
Ms Anti-FLAG M2 Coated Polystyrene Particles |
|||
MPAF-20-2 | Spherotech | 2 mL | 294 EUR |
DiagPoly Streptavidin Polystyrene Nanoparticles, 100 nm |
|||
DNG-P076 | Creative Diagnostics | 1 mL | 793 EUR |
DiagPoly Streptavidin Polystyrene Nanoparticles, 200 nm |
|||
DNG-P077 | Creative Diagnostics | 1 mL | 793 EUR |
DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 25 µm |
|||
DNG-P078 | Creative Diagnostics | 1 mL | 793 EUR |
DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 30 µm |
|||
DNG-P079 | Creative Diagnostics | 1 mL | 803 EUR |
DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 40 µm |
|||
DNG-P080 | Creative Diagnostics | 1 mL | 803 EUR |
DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 50 µm |
|||
DNG-P081 | Creative Diagnostics | 1 mL | 803 EUR |
DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 100 µm |
|||
DNG-P082 | Creative Diagnostics | 1 mL | 803 EUR |
DiagPoly Streptavidin Polystyrene Particles, 12 µm |
|||
DNG-P225 | Creative Diagnostics | 1 mL | 767 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm |
|||
DNM-C001 | Creative Diagnostics | 10 mL | 1010 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 1.0-1.4 µm |
|||
DNM-C002 | Creative Diagnostics | 10 mL | 1010 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm |
|||
DNM-C003 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Polystyrene Particles, 6.0-8.0 µm |
|||
DNM-C004 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 0.7-0.9 µm |
|||
DNM-C016 | Creative Diagnostics | 10 mL | 885 EUR |
DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 3.0-3.9 µm |
|||
DNM-C017 | Creative Diagnostics | 5 mL | 885 EUR |
DiagPoly Biotin Coated Polystyrene Particles, 6.0-8.6 µm |
|||
DNM-C018 | Creative Diagnostics | 5 mL | 1000 EUR |
Goat anti-Rat IgG (Fc) Coated Polystyrene Particles |
|||
RTPFC-60-5 | Spherotech | 5 mL | 289 EUR |
Goat anti-Rat IgG (H&L) Coated Polystyrene Particles |
|||
RTPXA-60-5 | Spherotech | 5 mL | 283 EUR |
Absolute Mag Streptavidin Magnetic Polystyrene Particles, 12 µm |
|||
WHM-G159 | Creative Diagnostics | 1 mL | 554 EUR |
Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 130 nm |
|||
WHM-G019 | Creative Diagnostics | 1 mL | 554 EUR |
Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 250 nm |
|||
WHM-G034 | Creative Diagnostics | 1 mL | 551 EUR |
Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 500 nm |
|||
WHM-G047 | Creative Diagnostics | 1 mL | 572 EUR |
Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 50 nm |
|||
WHM-G087 | Creative Diagnostics | 1 mL | 746 EUR |
Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 80 nm |
|||
WHM-G107 | Creative Diagnostics | 1 mL | 746 EUR |
Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran Coated, 100 nm |
|||
WHM-G121 | Creative Diagnostics | 1 mL | 642 EUR |
Absolute Mag Streptavidin Magnetic Nanoparticles, Dextran-coated, 70 nm |
|||
WHM-G246 | Creative Diagnostics | 1 mL | 793 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow, 0.4-0.6 µm |
|||
DNM-L088 | Creative Diagnostics | 5 mL | 663 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow, 0.7-0.9 µm |
|||
DNM-L089 | Creative Diagnostics | 5 mL | 663 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Yellow, 1.7-2.2 µm |
|||
DNM-L090 | Creative Diagnostics | 5 mL | 767 EUR |
DiagPoly Avidin Coated Fluorescent Polystyrene Particles, Pink, 0.4-0.6 µm |
|||
DNM-L091 | Creative Diagnostics | 5 mL | 663 EUR |
W niniejszej pracy ustalono wykładniczą zależność między doświadczalną stałą wiązania a liczbą par zasad w biotynylowanym DNA. Ta zależność prawdopodobnie dostarcza środków do przewidywania pojemności i szybkości wiązania w przypadkach, gdy wymagana jest adsorpcja, oczyszczanie i uwalnianie większych łańcuchów DNA.